以下结合咱们近3年的临床经验， 总结的PCR试验室核酸污染避坑攻略，如下：
较常见，发生概率在40%~60%之间；以重组质粒作为阳性质控品，发生污染的概率更大；
以构建的假病毒或重组病毒作为阳性质控品，参加核酸提取的进程中，也简单发生气溶胶污染；在试剂的制造进程中，触摸了污染的容器、移液器、枪头、溶液，核酸气溶胶等，导致试剂被污染。
特别是第一代PCR技能，发生概率在60%以上；PCR产品经重复屡次的扩增，其仿制量远远超越PCR的检测极限。
一个气溶胶所包括的拷贝数能够在104~106copies，因而即使是极微量的污染也足以构成试验成果假阳性。
可是，在采用了UNG/UDG防污染的PCR产品中，扩增产品引起的污染概率降至10%左右。
PCR扩增管的密封性是防备扩增产品污染的要害。假如密封不严，扩增完结后有蒸腾现象，液面不整齐，或许扩增进程中有“炸管”声响。
放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界触摸被污染;待提取样本中含有强阳性样本，其提取的样品中含有高浓度的阳性核酸，构成气溶胶构成污染。
气溶胶是由空气与液体外表冲突而发生的。开盖、晃动、加样器的重复抽吸等开放式操作，构成核酸气溶胶然后导致核酸污染。
以上核酸污染来历，均可构成气溶胶分散至空气中，或直接吸附到物体外表。因而，应特别注重由气溶胶导致污染的问题。重度污染假阳性的ct值可在24左右，中度污染ct值在30左右；轻度污染ct值在33左右。
2，物表的核酸污染物：移液器、离心机、核酸提取仪、传递窗、PCR仪、拆开的试剂盒、枪头盒、翻开的耗材等外表。
严厉的PCR试验室应有标准的正负压体系及四分区（或三分区），试验室应依照生物安全二级试验室及PCR试验室规划基本要求来建造。可参阅的标准为《GB50346-2011建造标准生物安全试验室修建技能标准》及卫健委下发的《医疗机构临床基因扩增查验试验室作业导则》。标准试验室如下图：
医疗口的试验室大多符合要求，在科研口和农业口的试验室应注重试验室的标准性建造！软件装备应依照卫健委相关技能文件规则，人员装备应专区专人，人员不行不同分区混用，物流、人流、气流做到单向活动！
临床上，门诊的新冠快检PCR试验室（或免提取办法）八成不标准。没有严厉依照标准PCR试验室建造，愈加简单发生污染。三分区（或二分区）、缓冲间、正负压、人员装备2人以上，这些基本要求没有到达，愈加简单发生气溶胶污染。
现有技能指导准则，只要求了挑选BSL-Ⅱ级生物安全柜，但并未规则具体型号。从临床经验来看，只要B2型生物安全柜能够用于加核酸模板。
A1型、A2型、B1型，循环风很简单构成核酸气溶胶的构成，然后构成污染，且污染很难铲除。B2型为全排放，无循环风，能够用于加核酸模板。
紫外灯能杀灭病毒，可是《医疗机构临床基因扩增查验试验室作业导则》指出，短片段的基因核酸对紫外线损害不灵敏。
惯例消毒剂如酒精、碘化物、戊二醛类、季铵盐等虽然能灭菌，可是不能降解核酸，或降解功率较差。
特别是酒精，它其实是核酸提取试剂中的一个组分，对核酸没有任何降解效果。已知的消毒剂中，次氯酸盐类消毒剂能够必定程度降解核酸，可是腐蚀性强，不能处理精密仪器及金属制品，简单腐蚀移液器吸杆影响tip头气密性。
4.1 汲取阳性对照（质粒）没有遵从“慢吸快打”的准则（这个需求操练构成“肌肉回忆”），新手往往是“快吸快打”，构成阳性样品污染枪头，或许在生物安全柜循环风的影响下，构成气溶胶飞溅，污染加样区域。应运用带有滤芯的枪头。
4.2 加样区没有放置台面垃圾桶：应把加完样的tip枪头，丢入含有次氯酸溶液的加盖垃圾桶中。由于次氯酸简单蒸发，因而应每天都要替换含氯消毒液！
生物安全柜＞核酸提取仪＞移液器＞PCR扩增仪（PCR管密封性）＞离心机；
阳性质控品＞强阳性样本＞PCR扩增产品（无UNG技能）＞PCR扩增产品（UNG技能），PCR管密封性是扩增产品是否引起污染的要害。
好像，美好的家庭都相同，不幸的家庭各有各的不幸。同理，标准的试验室都相同，污染的试验室各有各染状况。以上数据仅供参阅。
首要针对上述发生气溶胶污染的原因进行剖析，从人员、硬件装备、物料、办法（SOP）、环境五个方面进行仔细复盘，整改，查找污染原因。这是确保试验室国泰民安、不发生污染的基本前提。
丢掉3个分区的一切用过的耗材（主要是tip吸头和离心管、拆开的试剂盒等）、非一次性试验服作业服运用次氯酸盐溶液浸泡1小时后，进行洗刷处理；尽量运用一次性生物安全Ⅱ级防护服或试验服；专区专人处理。
空气中的核酸气溶胶的铲除，能够依托紫外线小时，可是留意，紫外线bp以下的短片段核酸不灵敏。简单留死角。
也能够运用纳克生物NKB®YNKBJ-1型“PCR CLEANER 核酸气溶胶污染铲除仪”依照1区、2区、3区的次序顺次守时处理2小时。能够处理紫外线. 物表
吸附在仪器设备等物体外表上的核酸污染处理：运用没有腐蚀性的核酸铲除剂。例如运用酶解法（耐热核酸降解酶）的铲除剂，处理移液器、生物安全柜、离心机、传递窗等区域进行喷洒铲除。静置15分钟即可。
每天试验完毕，运用NKB®的YNKBJ-1型“PCR CLEANER 核酸气溶胶污染铲除仪”在2区和3区，守时处理2个小时，铲除潜在的核酸污染物。
